分析方法 | 脂質(zhì)體藥物生物樣品分析的挑戰

  脂質(zhì)體藥物指將一種或多種活性成分(API)包載于脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內或(和)內水相內而形成載藥脂質(zhì)體的一類(lèi)藥物制劑。
  作為藥物遞送載體，其具備生物相容性良好、在體內可被生物降解以及定位靶向性強等優(yōu)點(diǎn)，在一定程度上改善某些藥物在人體內的藥代動(dòng)力學(xué)行為及藥效，減輕不良反應。
  目前中國已經(jīng)上市的脂質(zhì)體藥物有注射用鹽酸多柔比星、紫杉醇、兩性霉素B、鹽酸伊利替康脂質(zhì)體注射液等。
  脂質(zhì)體藥物進(jìn)入人體后，會(huì )釋放游離型藥物，因而體內會(huì )同時(shí)存在負載型藥物和游離型藥物。負載型藥物是藥物的貯庫,游離型藥物與藥效和不良反應有關(guān)。
  因此，針對傳統劑型進(jìn)行血漿總濃度分析的藥代動(dòng)力學(xué)研究是不夠合適的，甚至可能對脂質(zhì)體藥物產(chǎn)生誤導。在進(jìn)行脂質(zhì)體藥物藥代動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，需要分別測定血液中游離型藥物和負載型藥物的濃度。
  游離型藥物：從脂質(zhì)體中釋放出來(lái)的藥物，在體內主要以游離和血漿蛋白結合兩種形態(tài)存在
  負載型藥物：存在于脂質(zhì)體中未被釋放的藥物
  總藥物：游離型藥物+負載型藥物
  脂質(zhì)體藥物在進(jìn)入體內后，活性藥物一般會(huì )以游離型與負載型藥物的形式存在，進(jìn)行生物樣本分析時(shí)需要對二者進(jìn)行有效分離。分離生物樣本中游離型/負載型藥物的常用方法包括平衡透析、超速離心、超濾、固相萃取、排阻色譜等。選取的分離方法應防止脂質(zhì)體制劑在分離的過(guò)程中發(fā)生泄漏或破裂。
  對于體內游離型或負載型藥物的測定主要包括直接法與間接法。
  直接法：分別測定游離型藥物和負載型藥物，更能準確體現暴露量。
  間接法：測定總藥物濃度和游離型藥物濃度，取二者差值即為負載型藥物濃度。
  與普通藥物相比在生物樣本檢測方法建立過(guò)程中，游離型和負載型藥物的分離以及如何保證含有脂質(zhì)體的生物樣本在儲存、前處理過(guò)程中的穩定是方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中所面臨的挑戰。由此而涉及到的校正標樣及質(zhì)控樣本的制備、基質(zhì)效應、選擇性、回收率、穩定性甚至離心轉速等方面的考察，都與普通藥物有著(zhù)不同的考量。
  1-游離型和負載型藥物分離方式選擇
  選用合適的分離方法是負載藥物和游離藥物準確測定的先決條件。樣品分離方法應滿(mǎn)足：
  ·快速、簡(jiǎn)單，可用于高通量分析
  ·可有效分離各組分，以保證定量的準確性
  ·避免或減少脂質(zhì)體在樣品制備和儲存過(guò)程中泄漏出藥物
  ·去除血漿中內源性基質(zhì)的干擾
  超濾法
  原理：游離藥物通過(guò)超濾膜，而大分子的脂質(zhì)體藥物被保留在上腔室中。分離效果取決于選擇濾膜濾孔的大小。
  適用范圍：蛋白結合率低的親水性化合物。
  優(yōu)勢：超濾過(guò)程簡(jiǎn)單明了、操作準確度高?？梢允占獫{后立即在現場(chǎng)直接進(jìn)行，從而消除脂質(zhì)體在血漿樣品中長(cháng)期保存和凍融帶來(lái)穩定性問(wèn)題的影響。
  弊端：藥物可能被吸附到超濾裝置上，造成準確度的降低。
  原理：填料與化合物的相互作用將游離藥物保留在填料中，從而區分游離藥物和負載藥物。
  適用范圍：待測物能夠被固相填料吸附，且脂質(zhì)體雙分子層表面組分不與固相填料發(fā)生作用，能夠順利通過(guò)填料顆粒間的空隙流出。
  優(yōu)勢：可同時(shí)分析游離藥物和負載藥物。
  弊端：該操作復雜、成本較高，需解決脂質(zhì)體在血漿樣品長(cháng)期保存和凍融帶來(lái)穩定性問(wèn)題的影響。
  脂質(zhì)體的穩定性與多種因素相關(guān)，如pH、溫度、共存化合物、滲透壓、凍融次數等。在游離型藥物檢測時(shí)，脂質(zhì)體在儲存及樣品處理過(guò)程中的穩定性十分關(guān)鍵。
  如在上述過(guò)程無(wú)法保持脂質(zhì)體的穩定性，在采集樣本后，應及時(shí)對其進(jìn)行處理，如加入防凍劑、控制溫度、PH值、緩沖液濃度等或將脂質(zhì)體釋放的游離型和負載型藥物進(jìn)行分離后再分別進(jìn)行貯存，以避免在冷凍貯存過(guò)程中脂質(zhì)體發(fā)生破裂，干擾后續脂質(zhì)體藥物不同組分的測定。
  3-離心轉速
  全血在離心制備血漿樣本過(guò)程中可能存在脂質(zhì)體在血漿中分布不均的現象。因此需要考察離心力對脂質(zhì)體分層和滲漏的影響?？赏ㄟ^(guò)對不同離心力下血漿中脂質(zhì)體和游離藥物的峰面積的差異測定來(lái)判定脂質(zhì)體的均一性是否受到影響，從而選擇合適的離心力進(jìn)行血漿樣本的制備。另外，脂質(zhì)體可能在渦旋混合的過(guò)程中發(fā)生滲漏，因此在制劑的配制過(guò)程中需要輕緩，盡可能低轉速混合樣本或者加入防振搖保護劑。
  4-負載型藥物分析
  為了檢測負載型藥物中被脂質(zhì)體包裹的藥物，需要使脂質(zhì)體破裂以釋放藥物。脂質(zhì)體破封可以通過(guò)添加有機溶劑、去污劑、pH調節劑或提高溫度等來(lái)進(jìn)行。
  5-質(zhì)控樣品的設計
  因為脂質(zhì)體樣品的不同成份可能會(huì )相互影響，為了使生物分析方法準確進(jìn)行定量，應在適當的基質(zhì)中制備校準標準樣品，質(zhì)控樣品應模擬所產(chǎn)生樣品的組成?？梢酝ㄟ^(guò)將脂質(zhì)體和游離藥物分別加到血漿中來(lái)配制負載型藥物和游離型藥物的校準曲線(xiàn)，質(zhì)控樣品應同時(shí)包含負載型藥物和游離型藥物，以便充分評估這兩種成分之間的相互影響。
  硬件設施俱全
  晶易醫藥生物分析服務(wù)平臺專(zhuān)有實(shí)驗場(chǎng)地面積超1300㎡，配備多套LC-MS/MS、GC-MS/MS、ICP-MS、LOGAN全自動(dòng)透皮擴散系統、高速離心機等。

  質(zhì)量體系完善
  實(shí)驗室按照CNAS-CL01等認可文件建立了完善的管理體系，全流程“無(wú)紙化”辦公，數據監管可溯源。
  項目經(jīng)驗豐富
  ”722”之后，完成生物樣本檢測項目數量400+項，有使用SPE法和超濾法兩種前處理方式，完成鹽酸伊立替康、多柔比星、奧沙利鉑等多個(gè)脂質(zhì)體臨床前體內藥代動(dòng)力學(xué)研究的項目經(jīng)驗。項目團隊具備豐富的脂質(zhì)體藥物研究經(jīng)驗，也希望能為更多的脂質(zhì)體藥物研究賦能，服務(wù)于更多的制藥公司和研發(fā)機構，縮短研發(fā)周期、加快藥物上市、造福更多的病患。
  脂質(zhì)體制劑組分復雜，在生物分析方法建立過(guò)程中存在不小的挑戰。但始終離不開(kāi)一個(gè)原則，即找到合適的分離方法區分游離型和負載型藥物，并避免在整個(gè)分析測樣周期過(guò)程中脂質(zhì)體藥物泄漏或釋放，從而影響測定結果。